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Tout savoir sur l'inoculation en microbiologie

Inoculation en microbiologie
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En microbiologie, l’inoculation consiste à introduire des microorganismes dans un milieu de culture favorisant leur développement et leur reproduction, comme du sang. Cette opération est réalisée dans les laboratoires de recherche en vue de cultiver et d’étudier certaines bactéries et levures, nommées inoculum.

Quels sont les milieux de culture utilisés pour l’inoculation en microbiologie ?

Dans le domaine de la microbiologie, les milieux de culture les plus rencontrés en termes d’inoculation sont :
  • Les plaques d’agar pour la croissance des bactéries et autres microorganismes.
  • Une solution de gélose combinée aux nutriments de croissance bactérienne. Elle est versée dans des boîtes de Petri ou des plaques circulaires pour solidifier la gélose.

Comment effectuer l’inoculation en microbiologie ?

L’inoculation s’effectue à partir d’une petite boucle de stries plongée dans une solution contenant des cellules bactériennes. Cette boucle permet d’inoculer les plaques avec les bactéries. Ces plaques seront, par la suite, conservées à une température appropriée pour une utilisation dans une étude ultérieure.

L’inoculation peut aussi être effectuée sur des suspensions de milieu liquide pour faire pousser les bactéries. Pour ce faire, une seule culture de bactéries s’ajoute à une petite solution mélangée et pipetée dans le milieu liquide. Ce dernier contient les nutriments, les composés et d’autres molécules essentielles à la croissance des bactéries.

Quels sont les consommables utilisés pour l’inoculation en microbiologie ?

L’anse d’inoculation

L’anse d’inoculation, ou oese, est un outil de test portatif, comme un holter, composé d’un fil se terminant par une boucle fermée et montée sur un manche métallique. Elle s’utilise pour inoculer les milieux de croissance sur plaques ou en tubes avec des microorganismes comme les levures ou les bactéries. Cette inoculation s’effectue en vue d'un test, d’une incubation, d’une multiplication et d’une croissance des microorganismes.
L’oese intervient dans différentes applications microbiologiques telles que l’inoculation, l’échantillonnage stérile, la dilution en série ou l’étalement d’échantillons microbiologiques.
L’anse d’inoculation se présente sous deux formes :
  • L’aiguille d’inoculation droite, adaptée au prélèvement d’échantillons d’une colonie unique de microorganisme.
  • La boucle d’inoculation pour le prélèvement d’échantillons plus importants. Dans ce cas, la boucle est lisse et flexible pour faciliter le triage sans endommager la surface du gel.
Comme un holter tensionnel, les modèles d’anses d’inoculation se diffèrent par leur matériau :
  • L’anse d’inoculation en platine s’utilise pour prélever une culture de microorganisme en vue d’un repiquage ou d’un frottis. Elle est durable, mais nécessite une stérilisation entre chaque utilisation. Il faut ainsi la faire passer dans la flamme d’un bec Bunsen.
  • L’anse d’inoculation en nichrome est conçue en alliage de nickel et chrome. Plus compétitive en dureté et en prix, elle présente une surface lisse qui se refroidit rapidement après stérilisation.
  • L’anse d’inoculation en plastique, jetable en polyester non toxique, comme un glucomètre, présente une surface lisse suivant un code couleur précis.
Pour la stérilisation des anses réutilisables, il ne faut pas flamber directement la boucle dans la flamme du bec, au risque de produire des microgouttelettes de bactéries projetées dans toutes les directions. Seules les anses sèches peuvent être flambées en procédant de 3 façons :
  • Chauffer le fil en propageant la chaleur de la fixation au manche de façon à dessécher l’extrémité en boucle sans ébullition. Lorsque la boucle se dessèche, il suffit de plonger directement l’anse dans la flamme.
  • Plonger la boucle dans un petit bac à sable de façon à la nettoyer avant le flambage. Ce sable sera par la suite incinéré ou autoclavé avant d’être jeté.
  • Travailler avec 5 ou 6 anses et effectuer une rotation pour que chaque anse sèche avant flambage.

L’étaleur d’inoculation en microbiologie

L’étaleur de cellules ou étaleur de plaques s’utilise en microbiologie pour étaler l’inoculum sur une plaque de culture, comme une boîte de Pétri. Cet outil offre un ensemencement homogène sur toute la gélose, optimisant la répartition des colonies et facilitant le dénombrement en boîte. L’étaleur présente une surface arrondie lisse pour ne pas rayer ou couper la gélose lors de l’étalement.

Les étaleurs de cellules se différencient par leur forme, leur matériau et leur caractéristique. Ce sont les principaux critères à prendre en compte pour choisir un étaleur adapté au besoin :
  • Étaleur en verre, réutilisable et stérilisé à l’aide d’une flamme de bec Bunsen.
  • Étaleur en plastique PS ou PP, à usage unique.
  • Étaleur en acier inoxydable, réutilisable et stérilisable à la flamme ou par autoclavage à la vapeur à 121°C.
  • Étaleur stérile, stérilisé par irradiation aux rayons gamma.
  • Étaleur en forme L à bout recourbé évitant de gratter la surface du milieu de culture.
  • Étaleur en forme T permettant une pression uniforme lors de l’étalement.
  • Étaleur en triangle ou étaleur de Drigalski.
Voici un exemple d’utilisation d’un étaleur en verre réutilisable :
  • Tremper l’étaleur dans de l’alcool (éthanol à 70%) et le secouer pour éliminer l’excès d’alcool,
  • Enflammer l’étaleur à l’aide d’un bec Bunsen,
  • Laisser refroidir l’étaleur,
  • Répartir uniformément la culture microbienne sur la surface de la plaque de gélose en appliquant une pression uniforme,
  • Laisser la culture microbienne être absorbée par la plaque de gélose,
  • Incuber la plaque pour éviter la formation de gouttelettes d’eau.

L’ensemenceur rotatif

L’ensemenceur rotatif intervient après l’utilisation d’étaleur pour faciliter l’ensemencement des boîtes de Pétri.

L’ensemenceur rotatif se divise en deux catégories :
  • L’ensemenceur rotatif manuel pour une inoculation uniforme des boîtes de Pétri par rotation manuelle. Le plateau tournant présente une grande inertie et peut être utilisé dans les deux sens.
  • L’ensemenceur rotatif électrique ou ensemenceur en acier inoxydable offrant une rotation électrique sans fatiguer l’utilisateur. La manipulation de la plaque tournante se fait sans contact via un capteur. La vitesse de rotation est constante, entre 10 et 100 tours par minute. La plaque peut recevoir des boîtes de Pétri jusqu’à 100 millimètres de diamètre.

La boîte de Pétri

Les boîtes de Pétri s’utilisent en microbiologie pour la mise en culture des microorganismes, des bactéries et des cellules.

Les boîtes de Pétri se présentent sous différentes formes, tailles et matériau :
  • Boîte de Pétri en verre,
  • Boîte de Pétri en polystyrène haut grade,
  • Boîte de Pétri compartimenté,
  • Boîte de Pétri de 35, 60, 94, 100 ou 145 mm de diamètre
  • Boîte de Pétri stérile.
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Publié le 20/01/2023
Laurianne CHAPUS
Guide écrit par :
Laurianne CHAPUS
Spécialiste santé chez Hellopro
Assistante de laboratoire depuis une dizaine d’années, j’aime partager mes connaissances sur l’utilisation des machines, la vie de laboratoire, les analyses de sang et les tests ADN avec la communauté Hellopro.
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